基于灰色关联度分析和聚类分析的3种滇产重楼抗肝癌作用谱效关系探索

目的:研究长柱重楼、滇重楼和南重楼的HPLC指纹图谱与其抗肝癌作用的谱效关系,为明确重楼抗肝癌作用的物质基础提供实验依据。方法:采用HPLC建立3种重楼提取物的指纹图谱,流动相乙腈(A)-水(B)梯度洗脱(0～10 min,20%A; 10～20 min,20%～25%A; 20～30 min,25%～30%A; 30～40 min,30%～35%A; 40～50 min,35%～40%A; 50～60 min,40%A; 60～75 min,40%～45%A; 75～80 min,45%～60%A),流速0. 9 m L·min~(-1),检测波长203 nm;利用噻唑蓝(MTT)比色法测定3种重楼提取物对肝癌HepG2细胞的增殖抑制作用,计算半数抑制浓度(IC_(50));运用聚类分析(HCA)和灰色关联度分析(GRA)研究3种重楼指纹图谱和抗肝癌作用的关系,找出对抗肝癌作用贡献较大的成分。结果:在3种重楼的HPLC指纹图谱中,确定其中11个色谱峰为共有峰。作用时间72 h时长柱重楼、滇重楼、南重楼的IC_(50)分别为148. 33,178. 87,208. 09 mg·L~(-1),其中长柱重楼的抗肝癌活性最强。灰色关联度结果显示,滇重楼共有峰中关联度较高的为1～10号峰,长柱重楼共有峰关联度较高的为1～7号峰,南重楼共有峰中关联度较高的为1～4,6～10,N1号峰,与IC_(50)关联度均0. 7。各重楼变量的聚类分析结果显示,可与IC_(50)聚为一类的色谱峰的关联度均 0. 7。结论:建立了3种重楼的HPLC指纹图谱,重复性良好。3种重楼中的1～4,6和7号色谱峰对抗肝癌药效贡献最大。     

重楼多指标UPLC定量分析及其化学品质综合评价

目的探讨10种重楼药材中7种有效成分含量,并进行化学成分整合评控,为其资源评价提供了科学依据。方法收集不同产地55批重楼药材,采用UPLC法测定重楼皂苷Ⅰ、重楼皂苷Ⅱ、重楼皂苷Ⅵ、重楼皂苷Ⅶ、薯蓣皂苷、重楼皂苷H、纤细薯蓣皂苷的含量,进一步采用TOPSIS数学模型对含量结果进行归一化与多指标数据集成化,获得重楼中7种指标的化学品质综合指数。结果 10种重楼药材的综合评价排名由高到低依次为长柱重楼(Ci=0.275 5)多叶重楼(Ci=0.273 2)大理重楼(Ci=0.269 8)滇重楼(Ci=0.244 5)南重楼(Ci=0.234 5)狭叶重楼(Ci=0.159 1)黑籽重楼(Ci=0.141 6)矮重楼(Ci=0.117 8)七叶一枝花(Ci=0.115 1)毛重楼(Ci=0.114 9),表明不同种重楼化学综合质量差异较大,其长柱重楼、多叶重楼和大理重楼的化学综合质量优于滇重楼,南重楼与滇重楼的结果较为接近,可作为滇重楼资源扩充的优势品种。结论通过TOPSIS整合评控对重楼类中药材的质量评价有一定的参考依据。     

重楼活性单体PP-22对人结肠癌SW620细胞增殖和凋亡的影响

目的 探讨重楼活性单体PP-22对人结肠癌SW620细胞增殖和凋亡的影响及其联合5-氟尿嘧啶(5-FU)和洛铂的抗肿瘤效果。方法 采用噻唑蓝(MTT)法和克隆形成抑制实验观察不同浓度PP-22对人结肠癌SW620细胞增殖的抑制作用;分别观察PP-22联合5-FU和洛铂对人结肠癌SW620细胞增殖的抑制作用;碘化丙锭单染流式细胞术检测细胞周期变化及细胞凋亡水平;Western blot法检测PP-22作用后细胞凋亡相关蛋白的表达。结果 重楼单体PP-22能显著抑制SW620细胞的生长,作用呈剂量-效应关系;随着PP-22浓度的增加,细胞克隆形成逐渐减少,与细胞对照组和DMSO组相比有显著差异;PP-22联合不同浓度的5-FU和洛铂作用于SW620细胞48 h,可提高SW620细胞对5-FU和洛铂的敏感性;不同浓度PP-22作用于SW620细胞后,细胞周期阻滞于S期;PP-22作用后存在Caspase-3和Caspase-9蛋白的活化和降解,抗凋亡蛋白Bcl-2、Bcl-xL减少,促凋亡蛋白Bax的表达增加。结论 PP-22能显著抑制人结肠癌SW620细胞增殖,诱导细胞凋亡,提高SW620细胞对5-FU和洛铂的敏感性。     

濒危民族药重楼种质资源调查及质量评价研究

重楼是一味传统民族药,其基源为重楼属多种植物的根茎,该属植物全世界共有26种,我国分布有20种.以横断山脉南段为核心的川、滇两省是重楼属植物在欧亚大陆的地理分布中心,也是重楼药材的传统产区.本课题对该地区重楼属的种质资源、开发利用情况、濒危状态开展了实地调查,并依据2005年版<中国药典>重楼药材的质控标准对该地区50份不同产地的重楼药材进行了质量评价,结果 可为重楼药材质量的系统评价和资源保护利用提供参考.     

Phytochemistry, Pharmacology, Toxicology, and Structure-Cytotoxicity Relationship of Paridis Rhizome Saponin

The rhizomes of Paris polyphylla var. yunnanensis and P. polyphylla var. chinensis are used as traditional herbal medicines in many parts of China. The Paridis Rhizome saponin (PRS), as the active ingredient, has played an important role in hemostasis, antibacterial action, and inflammation counteraction, bearing some analogy to Gongxuening and Yunnanbaiyao in efficacy. Modern pharmacological experiments have proved that PRS possesses two main sapogenins: diosgenin and pennogenin, which could provide a lot of clinical treatment effects (anti-oxidation, anti-inflammation, anti-apoptosis, anti-metastasis, and immunostimulant, etc.). In the past, several main steroid saponins have been studied in a number of randomized controlled trials for their effects and mechanisms mainly on antitumor performance. The extensive results have demonstrated that PRS was an effective group of active components to antitumor clinical trials. In this article, we reviewed the reported phytochemical, pharmacological, and toxicological properties of PRS and compared the structure-cytotoxicity relationship of PRS in antitumor effects.     

重楼总皂苷对多发性创伤大鼠血清细胞因子水平的影响

目的:探讨重楼总皂苷(RPTS)对多发性创伤模型大鼠血清TNF-α、IL-1β及IL-6水平的影响。方法:将68只Wistar大鼠随机分成5组,除空白对照组外,其余各组按多发性创伤模型标准制模,制模成功后1h,除空白对照组和模型对照组外各组予以不同浓度的重楼总皂苷(RPTS)灌胃,干预后6h采血,以ELISA法检测血清中TNF-α、IL-1β及IL-6浓度。结果:重楼总皂苷(RPTS)干预组大鼠血清TNF-α、IL-1β及IL-6浓度非常显著地低于模型对照组(P<0.001)。结论:重楼总皂苷可以降低多发性创伤模型大鼠血清中的TNF-α、IL-1β及IL-6水平。     

不同生长年限云南重楼药材质量比较研究

目的 基于性状鉴别、浸出物及含量测定研究,评价不同生长年限云南重楼药材质量。方法 采用传统经验鉴别药材外观性状,运用热浸法测定药材醇溶性浸出物含量,采用高效液相色谱法对样品中重楼皂苷Ⅰ、重楼皂苷Ⅱ、重楼皂苷Ⅲ、重楼皂苷Ⅳ、重楼皂苷Ⅴ、重楼皂苷Ⅵ、重楼皂苷Ⅶ、重楼皂苷D和重楼皂苷H的含量进行测定。结果 不同生长年限云南重楼药材外观性状、浸出物、有效成分含量差异较大。随着生长年限的增加,云南重楼药材单个质量、直径及体积明显增加;8年生云南重楼药材醇溶性浸出物质量分数最高;就药材的有效成分含量而言,7年生药材9种重楼皂苷总质量分数最高。结论 综合性状鉴别、浸出物及含量测定结果,最终初步确定云南重楼以7年生药材质量为最佳。     

HPLC法测定不同来源重楼药材中7种甾体皂苷的含量

目的分析不同来源重楼属植物的主要活性成分,比较7种甾体皂苷的含量,为重楼药材的鉴别和品质评价提供参考依据。方法采用HPLC法测定不同来源重楼属15批药材中重楼皂苷Ⅶ、重楼皂苷H、重楼皂苷Ⅵ、重楼皂苷Ⅱ、薯蓣皂苷、重楼皂苷Ⅰ和重楼皂苷Ⅴ的含量。色谱条件为Inertsil ODS-3C18色谱柱(150mm×4.6mm,5μm);流动相为乙腈-水(50∶50);检测波长为203nm;流速为1.0mL·min~(-1);柱温为35℃;进样量为20.0μL。结果 15批样品中,重楼皂苷Ⅶ、重楼皂苷Ⅵ、重楼皂苷Ⅱ和重楼皂苷Ⅰ4种皂苷含量之和均在1.849~20.222mg·g~(-1)之间;样品中7种皂苷含量之和在2.351~37.366mg·g~(-1)之间。精密度、稳定性和重复性实验的RSD值均≤3.0%,7种皂苷的平均加样回收率均在95.92%~103.20%之间(RSD≤3.0%,n=5)。结论因产地或种类不同,重楼皂苷的含量存在一定差异。基于15批重楼样品的HPLC图谱,构建了重楼药材的HPLC指纹图谱,实验结果可用于重楼的真伪鉴别和质量评价。     

散结消肿贴中大黄重楼提取工艺优选研究

目的：优选散结消肿贴中大黄、重楼的渗漉提取工艺。方法：以总固体物得率和总蒽醌得率为指标，用正交实验优选。结果：工艺中影响最大的因素是乙醇浓度，其次是乙醇用量，浸泡时间影响较小。最佳工艺条件为乙醇浓度65％，乙醇用量8倍量。浸泡时间24h。结论：渗漉法操作简单，成份破坏少，用优选所得条件进行提取，总蒽醌和总固体物得率均较高，优选结果可用于散结消肿贴中大黄、重楼的提取。     

高效液相色谱法和薄层色谱法测定重楼中薯蓣皂苷元的含量

目的：采用高效液相色谱和薄层色谱技术，分别测定重楼中薯蓣皂苷元的含量。方法：采用HPLC法，选用ODS柱，流动相：乙腈-水（90：10），检测波长：203nm，柱温：35℃；TLC法选用硅胶G板，展开剂：环已烷-乙酸乙酯（4“1），测定波长：610nm，参比波长：420nm。结果：线性范围分别为1.2-7.2μg（r=0.9998），0.2-1.0μg(r=0.9957)。平均回收率分别为102.2％，RSD=3.39％（n=6）；100.9％，RSD=2.68％（n=6）。结论：两种方法均可用于重楼中薯蓣苷元的质量控制。